细胞培养过程中被支原体感染一般难以察觉,细胞培养环境空间消毒服务对切断微生物污染有决定性作用。过氧化氢气体灭菌消毒服务代替甲醛熏蒸用于细胞培养室将是未来的发展趋势,也是新型的消毒服务方式。
细胞支原体污染检测和培养室环境空间消毒服务方案
细胞培养中支原体污染发生频繁,有时带来的损害会造成试验的巨大损失,应常常检测和及时排除支原体污染,细胞培养空间环境预防消毒,创造健康安全的细胞生长环境,获得准确的试验结果。
支原体是一种类似细菌但无细胞壁的原核微生物,直径为50-300 nm,可以很容易地通过滤膜混入培养体系。普通抗生素(如常用于培养细胞的双抗体)对其不起作用。因为细胞被支原体污染后没有明显的感染迹象,污染后不能及时发现,往往给大家的细胞培养带来麻烦。1956 年人类初次在细胞培育中发现支原体污染问题,其后在鸡胚、 动物细胞、昆虫细胞及以这些基质生产的生物制品中连续发现。有报导,在细胞培养室中,它的平均发生率乃至可高达63%。在生物制品中,它的发生率为1%~3%。
支原体污染的来源
工作环境的污染操作者自身的污染(有些支原体是人体内的正常菌群)
培养物的污染
支原体污染细胞造成的交叉污染
实验设备造成的污染
用于制备细胞的原组织或器官的污染
其间,环境是造成支原体污染的一个主要原因。特别是多人培育细胞时共用同一培育箱、同一操作台,即使其间一个人很留意,但如果其他试验者给环境中带进支原体,以及培育箱箱门打开频繁,也会显著添加细胞中呈现支原体污染的风险。因而环境预防远比在培育液中加入抗支原体药物重要。
细胞培养中支原体污染的检测方法和环境空间的消毒方案,可以从根本上预防和解决细胞培养中的支原体污染问题。
常规支原体预防在细胞培养中非常重要。一般来说,每两三个月定期检测是必要的。如果新的细胞进入实验室,或者细胞将被储存在液氮中,它们应该被检测。当然,如果细胞有问题,应该立即检测出来。一些研究报道25%的细胞被支原体污染。
细胞支原体污染检测和培养室环境空间消毒服务方案
支原体检测方法
支原体的检测方法主要有常规分离培养、DNA染色、酶联免疫吸附试验和PCR技术。其中,DNA染色被中国药典列为第二可选方法,检验周期缩短至4-15天。这种方法的原理是用核酸对吸附在细胞表面的支原体进行染色,特异性差,通常作为辅助方法。LIGASOVÁ等人建立了荧光显微镜检测支原体的方法,与传统的DNA染色法相比,提高了灵敏度,但没有显著提高特异性。酶联免疫吸附试验(ELISA)采用抗体夹心法检测支原体污染,具有良好的特异性和敏感性,但可检测的支原体种类范围较窄。杂交技术主要见于一些早期的文献报道。PCR检测方法以其快速、准确、灵敏、特异的特点,成为应用最广泛的支原体快速检测方法。
细胞室环境空间消毒服务方案
1.环境空气消毒
2.表面消毒
3.生物安全柜
4.洁净工作台消毒
5.培养箱消毒。
目前大多数细胞培养室只是简单配备了臭氧消毒器,但从建立到后期从未进行过消毒(熏蒸、灭菌),给细胞培养环境的微生物污染带来了相当大的隐患和风险。因为臭氧消毒能力有限且不稳定,无法完全覆盖,无法杀死休眠微生物。单纯的臭氧消毒并不能深度解决环境微生物问题,只能说是微生物水平控制的辅助手段。
根据FDA、新版GMP及相关国际组织的规定,目前无菌室环境的主流灭菌方式为过氧化氢气体灭菌,环保无毒无残留,安全快捷。过氧化氢气体灭菌代替甲醛熏蒸用于细胞培养室将是未来的发展趋势。梵通过氧化氢干雾消毒机器人能快速杀灭细菌、真菌、支原体、病毒,在细胞培养室环境消毒中的应用更具创新性和实用性。
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